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Pyrosequencing 在腫瘤基因甲基化研究的應(yīng)用
甲基化研究對于基因的調(diào)控和腫瘤的發(fā)生有非常密切的關(guān)系。在一般正常的細胞中，基因調(diào)控區(qū)CpG島處于非甲基化的狀態(tài)。而當(dāng)細胞發(fā)生癌變后，這些CG區(qū)域往往呈現(xiàn)甲基化狀態(tài)。英國醫(yī)學(xué)刊物《Lancet》報道奧地利因斯布魯克醫(yī)學(xué)院的專家們早就可以通過檢測大便中DNA的甲基化變化，把健康人的大便與結(jié)腸癌患者的大便區(qū)分開。大便標(biāo)本中SFRP2 甲基化的程度是診斷結(jié)腸癌最靈敏的標(biāo)記。研究人員發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生以及一些遺傳病的出現(xiàn)和基因甲基化有非常密切的關(guān)系。目前DNA甲基化研究是腫瘤分子生物學(xué)研究的一個重要領(lǐng)域。
Pyrosequencing技術(shù)作為一種新的序列分析技術(shù)，能夠快速地檢測甲基化的頻率，對樣品中的甲基化位點進行定性及定量檢測，為甲基化研究提供了新的途徑。Pyrosequencing是一種通過合成方法進行序列分析的方法，它通過核苷酸和模板結(jié)合后釋放的焦磷酸引發(fā)酶級聯(lián)反應(yīng)，促使熒光素發(fā)光并進行檢測。這項技術(shù)曾經(jīng)被用作單核苷酸多態(tài)性（SNP）的基因型和單倍型的檢測，以及細菌和病毒的鑒定和分型研究。這項技術(shù)的一個主要特點是在Pyrogarm™軟件上顯示的峰值高度來自于序列分析的原始數(shù)據(jù)，通過峰值的高度可以精確的檢測混合DNA模板中等位基因的頻率。
Pyrosequcing系統(tǒng)可以獲得以下結(jié)果：
1 那些DNA序列位點發(fā)生甲基化？
2 每個位點的甲基化程度是多少？
3 這些位點的甲基化和疾病的相關(guān)性？
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