西亞試劑：：T-RFLP簡介

T-RFLP簡介

        T-RFLP中文可翻譯為：末端限制性片段長度多樣性，又可以稱為16sRNA基因的末端限制性片段分析技術(shù)。是一種新興的研究微生物多態(tài)性的分子生物學(xué)方法，日亦受到研究人員的重視。該技術(shù)已經(jīng)成功應(yīng)用于各種微生物群落的分析比較、研究微生物群落多樣性及結(jié)構(gòu)特征等多方面。

　　T-RFLP的技術(shù)原理是根據(jù)的保守區(qū)設(shè)計(jì)通用引物，其中一個(gè)引物的5‘末端用熒光物質(zhì)標(biāo)記，常用熒光物質(zhì)有HEX,TET,6-FAM等。提取待分析樣的中DNA，以他為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)張，所得到的PCR產(chǎn)物的一段就帶有這種熒光標(biāo)記，然后PCR產(chǎn)物有合適的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行消化，一般選用酶切位點(diǎn)為4bp的限制性內(nèi)切酶。由于在不同細(xì)菌的擴(kuò)增片段內(nèi)存在核苷酸序列的差異，酶切位點(diǎn)就會(huì)存在差異，酶切后就會(huì)產(chǎn)生很多不同長度的限制性片段。消化產(chǎn)物用自動(dòng)測序儀進(jìn)行測定，只有末端帶有熒光性標(biāo)記的片段能被檢測到。因?yàn)椴煌L度的末端限制性片段必然代表不同的細(xì)菌，通過檢測這些末端標(biāo)記的片段就可以反應(yīng)微生物群落組成情況。

　　這種方法還可以進(jìn)行定量分析，在基因掃描圖譜上，每個(gè)峰面積占總峰面積的百分?jǐn)?shù)代表這個(gè)末端限制性片段的相對(duì)數(shù)量，即末端限制性片段的數(shù)量越大其所對(duì)應(yīng)的面積越大。

丙烯醛肉桂醛桂皮醛4-硝基肉桂醛