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西亞試劑 —— 品質(zhì)可靠,值得信賴
T-RFLP的主要原理與步驟
T-RFLP的主要原理與步驟大體如下:
1.提取DNA;
2.設(shè)計(jì)1-2對(duì)通用引物(主要根據(jù)16SrRNA基因)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,(每對(duì)引物的1條5'端標(biāo)記熒光);
3.產(chǎn)物純化后,酶切.每組酶切產(chǎn)物中只有一條片段末端標(biāo)記了熒光。
4.酶切產(chǎn)物通過(guò)毛細(xì)管電泳,或測(cè)序膠電泳,熒光掃描。
5.結(jié)果分析:每1個(gè)熒光峰至少代表1個(gè)細(xì)菌或幾個(gè)近緣的細(xì)菌,峰面積可粗略認(rèn)為與細(xì)菌在某一部位的微生態(tài)群落中的數(shù)