西亞試劑：：瓊脂糖凝膠回收

瓊脂糖凝膠回收

       從瓊脂糖凝膠中回收DNA，是一種簡單不過的常規(guī)實驗操作。但是由于膠回收的質(zhì)量和數(shù)量直接影響后繼的一系列實驗——比如酶切連接、轉(zhuǎn)化篩選、測序或者PCR擴增、標(biāo)記乃至顯微注射等等，所以這一步的操作也顯得非常重要。

一、膠回收的關(guān)鍵參數(shù)

    膠回收的質(zhì)量直接影響后繼實驗的成功與否。要想做好膠回收，無論是自己親力親為還是借助目前五花八門的膠回收試劑，最基本的評定標(biāo)準(zhǔn)無外乎這么幾個:質(zhì)量（ 回收產(chǎn)物的純度和濃度），回收效率，操作方便（速度），柱子的載量等等。

回收產(chǎn)物質(zhì)量：回收產(chǎn)物的質(zhì)量主要指純度。常規(guī)電泳過程中，普通級別的瓊脂糖自帶的一些性狀不明的多糖，會連同DNA一起從凝膠中抽提出來，會強烈抑制后繼的連接、酶切、或者標(biāo)記、擴增等實驗。從凝膠中回收DNA片斷，產(chǎn)物的純度自然是我們考慮的第一要務(wù)。對于大片斷DNA回收，質(zhì)量還包括了產(chǎn)物的完整與否，如果機械剪切力使得回收產(chǎn)物大小不一致，后果決不是你希望碰見的。而對于較小片斷回收，質(zhì)量其實還包括了回收產(chǎn)物的濃度。因為產(chǎn)物濃度太小，對后繼實驗同樣也有影響，比如連接、標(biāo)記實驗等等就很不爽，往往不得不再濃縮一次，增加了操作的復(fù)雜性。此外，極微量的純化介質(zhì)或者是某些試劑混入回收產(chǎn)物中也會對結(jié)果產(chǎn)生致命的影響。

回收率：回收得率，是我們考慮的另一個重要參數(shù)。由于上電泳的樣品量通常都很少，電泳的過程本身也會導(dǎo)致樣品的分散和損失，因而盡可能多的回收電泳凝膠條帶中的目的片斷，提高產(chǎn)物得率，對于后繼實驗來說是非常重要的。回收率的多少通常和回收產(chǎn)物的大小以及量的多少有關(guān)，比如DNA片斷越大，和固相基質(zhì)的結(jié)合力越強，就越難洗脫，回收率就低；又比如說，DNA的量越少，相對損失越大，回收率越低。因此，根據(jù)情況選擇不同的方法是很重要的。值得注意的是，由于樣品的大小和多少對回收率都有顯著的影響，所以回收率并非是一成不變的。

其他：操作方面，相信大家都會比較喜歡操作簡單，快速，應(yīng)用起來方便的方法或者產(chǎn)品。比如溶膠的緩沖液中添加指示劑，可以指示溶膠的溶液pH值就是很方便的設(shè)計；離心過柱就比離心沉淀要簡單方便。載量，就是每次回收最多能回收的產(chǎn)物的量。這個自然是越大越好了，因為對于純化柱或者一定量的純化介質(zhì)，過量的產(chǎn)物吸附不了就是被浪費掉的。難免有時你需要回收比較大量的產(chǎn)物，大載量就很有優(yōu)勢——同一個片斷你要用2個柱子，不進浪費金錢，浪費時間，更讓人郁悶。

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