西亞試劑：：QiaEX相關(guān)參數(shù)

DNA size Recovery*

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44 bp 75%
75 bp 75%
500 bp 95%
7.5 kb 85%
23.5 kb 75%
48.5 kb 60%
 
Binding capacity: 5 µg DNA per 10 µl QIAEX II suspension
Recovery: 60–95% of DNA fragments (40 bp – 50 kb)
Elution volume: Elution volume: 20 µl

    類似方法的產(chǎn)品還包括Roche的Agarose Gel DNA Extraction Kit

2 Agarose Gel DNA Extraction Kit
產(chǎn)地：Roche-Applied Science
回收范圍：0.4kb—100kb(單核苷酸〉20bp）

特點：

標(biāo)準(zhǔn)的或低熔點瓊脂糖回收都可
可以用于克隆連接或者高特異性標(biāo)記（基本標(biāo)記或缺口平移primed labelling or nick translation）
0.4kb—9.5kb范圍內(nèi)回收率為80%
通用型試劑盒：大至100kbDNA片段到小到寡核苷酸都可以
操作簡單
均勻統(tǒng)一的純化介質(zhì)珠，減少剪切力，無雜質(zhì)（比如酶抑制劑），不會影響后續(xù)反應(yīng)
使用心得：

    Roche的膠回收試劑盒原理也是一樣的，可以完成幾乎實驗室有關(guān)DNA膠回收的所有需要，從基因組大片段DNA到單核苷酸，并且在回收率上也有出彩的表現(xiàn)：0.4-9.5kb，大約80%；10-100kb，大約60%；單核苷酸（>20堿基），大約65%

    其實，純化介質(zhì)在使用中有一些操作的問題，其實改良起來也并不很困難。只要多提供一個單純過濾離心柱，原來的問題看來應(yīng)該不難解決——直接將混合有純化介質(zhì)的溶膠液加入柱子中過濾離心，吸附了DNA的純化介質(zhì)在膜上，上清徹底離心到管中，不就不用擔(dān)心會懸浮沉淀、干沙等等問題了嗎？其實Promega就有這樣的解決方法，不過由于那試劑盒主要目的是純化PCR產(chǎn)物或者酶切反應(yīng)中的DNA，本身不帶溶膠液，所以在這里就不具體介紹了。

    這種方法通常需時半小時左右，算是比較快速省事的。畢竟大片斷的操作要格外小心。這里再重復(fù)介紹一下其他的一些方法。

    1. 低熔點瓊脂糖：如果你手頭有Cambrex（原來的FMC，瓊脂糖行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的制定者）的SeaPlaque GTG瓊脂糖，那真是太幸福了。SeaPlaque是世界上第一個低熔點瓊脂糖系列，Cambrex的GTG（遺傳技術(shù)級別）級瓊脂糖特別去除了抑制酶反應(yīng)的各種雜質(zhì)，可以在瓊脂糖凝膠中進(jìn)行各種酶切、連接、PCR、轉(zhuǎn)化等等實驗。所以，SeaPlaque GTG凝膠電泳后切下的條帶就可以在65度融化（20-30度凝固），直接進(jìn)行后繼的酶切連接PCR等等的反應(yīng)了，當(dāng)然，前提是你的電泳槽和Buffer要足夠干凈，最好是專用的。這個反應(yīng)條件實在是足夠溫和，當(dāng)然不便宜，25克瓊脂糖要1788大元!特別適合分辨200bp—25kb的片斷。其實，也就是大小通用的方法。

    如果只是普通的低熔點瓊脂糖也不要緊，切下來的膠塊加入緩沖液65度融化后冷卻到室溫，可以直接用等體積酚抽，也可以用瓊脂糖酶來消化。酚抽時注意不要劇烈振蕩以免損傷大片斷DNA，兩相間的白色物質(zhì)是瓊脂糖，取上清酚氯仿抽提后乙醇沉淀。瓊脂糖酶可以消化融化的瓊脂糖為低聚糖，隨后用酚氯仿抽提后用乙醇沉淀。New England Biolabs的這種酶50單位價格300多，每200mg 1%凝膠用一個單位酶，42度條件下反應(yīng)。Takara的這種酶100單位260多，同樣體積的凝膠要用2個單位，可以在60度反應(yīng)，所以也可以用常規(guī)瓊脂糖。只是常規(guī)瓊脂糖在65度挺難融，很費時間。

    2. 電洗脫的原理是將含DNA片斷的凝膠放在一個用半透膜隔離的空間中，通過電泳的電流使得DNA離開凝膠進(jìn)入液相，回收液相后純化沉淀其中的DNA分子。電洗脫主要的麻煩是在透析帶都比較大、兩頭要綁，沒有剛性的袋子使用不方便，中間溶液體積大，膜面積大容易吸附產(chǎn)物。以色列一家公司出品的GeBA產(chǎn)品，是在離心指管兩邊開窗貼上透析膜，這種管子可用于透析或者電洗脫，由于管子有剛性，內(nèi)容體積固定，膜面積也很小，同時還提供電洗脫時放在電泳槽中的架子，操作起來十分方便，很大程度上解決了這個困擾。電洗脫條件溫和，對瓊脂糖沒有特殊要求，同時還可以用于丙烯酰胺凝膠中的片斷回收或者是蛋白質(zhì)的回收。GeBA的產(chǎn)品基因有限公司有售，此外Merck旗下的Novagen也引進(jìn)了類似的產(chǎn)品，價格相當(dāng)。

    3. 挖槽法。限于個人習(xí)慣的一些不入流的小技巧，有時應(yīng)急（比如定的產(chǎn)品老不到貨時）也可以對付一下。無非就是在條帶前面挖坑，加入緩沖液，繼續(xù)電泳半分鐘，手提紫外觀察，等條帶全“下海”就把坑里的溶液都吸上來。大片斷會遇到的問題通常是出膠慢，上對岸倒快，所以應(yīng)對就要用2手，一個是在坑里緩沖液中加點什么讓泳動速度降下來（低熔點瓊脂糖就是其中一個方法），要不就在對岸堵上孔徑特小的膜，等這邊條帶全部下水后反向電泳一下，讓被膜阻擋的DNA回頭，離開那膜。然后取溶液純化DNA。這些方法通常在條帶濃，回收率要求不高的時候可以應(yīng)急，挺磨耐性的，平常還是用Kit的算了。這里提到的老方法，都要特別注意，切膠的刀要干凈鋒利，切口平滑，切得不整齊有時DNA出膠很慢，不知道為什么。

丙烯醛肉桂醛桂皮醛4-硝基肉桂醛