西亞試劑：：DNA小片段的純化回收

小于100bp的片斷通常在電泳時(shí)就比較難觀察分辨，需要用分辨率很高的瓊脂糖或者丙烯酰胺凝膠。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor瓊脂糖。所以實(shí)際上對(duì)于小片斷，可以分為兩種情況：一個(gè)是真的要回收電泳中特別小的片斷，這種情況我們前面有提到，比如Qiagen MinElute系列可以回收70bp以上的片斷；而QIAEX純化介質(zhì)可以回收40bp以上的小片斷，可以根據(jù)情況選擇。另外一種情況是要去除一些小片斷或者是核苷酸、標(biāo)記物、或者是一些酶切碎片，或者去掉接頭（Linker/Adeptor）或者什么的。其實(shí)這時(shí)已經(jīng)不需要用電泳來(lái)分別，也就算不上膠回收的范圍，不過(guò)既然提到了就順手寫(xiě)寫(xiě)。

    PCR產(chǎn)物回收試劑盒實(shí)際上也是一種除去小片斷的試劑盒，通?；厥辗秶?00bp到10KB之間，也就是說(shuō)將小于100bp（或者70bp）的引物或者引物二聚體連同其他雜質(zhì)一同去除，操作簡(jiǎn)單，只需要將PCR產(chǎn)物加入過(guò)濾純化柱中離心，清洗一次，洗脫就可以了，5分鐘搞定，回收率高達(dá)95%。PCR后需要酶切時(shí)，以前常常為省略跑膠純化的步驟，要在PCR產(chǎn)物中直接酶切，往往導(dǎo)致一些酶切問(wèn)題，如今用這種PCR產(chǎn)物純化試劑盒就不用電泳，5分鐘OK了。用不著冒險(xiǎn)直接酶切——萬(wàn)一酶切有問(wèn)題多麻煩呀。通常同一個(gè)品牌的PCR產(chǎn)純化試劑盒和膠回收試劑盒的柱子是同樣的柱子，區(qū)別是膠回收試劑盒多一個(gè)溶膠液。所以，你可以用膠回收試劑盒做PCR產(chǎn)物純化，溶膠液照加可也，調(diào)pH和鹽濃度而已。

    如果需要純化寡核苷酸或者引物，Qiagen的QIAquick Nucleotide Removal Kit是一個(gè)好選擇?？梢杂糜诩兓?7-40mer的寡核苷酸小分子，以及40bp-10kb的DNA。用于純化標(biāo)記反應(yīng)是不錯(cuò)的選擇，方法和PCR產(chǎn)物回收試劑盒是一樣的，很方便。除了這種膜吸附的柱子，還有一種凝膠過(guò)濾原理的柱子也可以用于分段收集不同大小的產(chǎn)物，那個(gè)在建庫(kù)等實(shí)驗(yàn)中用的比較多，也有用于純化標(biāo)記反應(yīng)中的未標(biāo)記分子或者核苷酸的。

    很小的DNA片斷常常會(huì)用PAGE膠電泳。PAGE膠好像還沒(méi)有很好的溶解方法，除了我們前面提到的電洗脫，Qiagen還提供一些私人方法，在應(yīng)急的時(shí)候可以嘗試。將切割下來(lái)的PAGE條帶沖洗后加入指管中，加入2倍體積的分散緩沖液（0.5M醋酸胺、10mM的醋酸鎂，1mM EDTA， 0.1%SDS，pH8.0）50度保溫30分鐘，離心取上清，避免混入碎膠，加入3倍體積的溶膠液，后面步驟一樣。這樣也可以回收PAGE膠里的片斷。

丙烯醛肉桂醛桂皮醛4-硝基肉桂醛