西亞試劑：：新型的基因分型技術(shù)(SNP分型):巢式PCR-RFLP技術(shù)

隨著生命科學(xué)迅猛的發(fā)展，與之相適應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)手段越來(lái)越復(fù)雜和專業(yè)化，對(duì)于科研人員實(shí)驗(yàn)技能要求也越來(lái)越高。由于生物學(xué)實(shí)驗(yàn)高度的復(fù)雜性、使得一個(gè)科研人員往往只能精通某一方向的實(shí)驗(yàn)。因此許多生物技術(shù)公司應(yīng)孕而生，他們提供了許多專業(yè)的服務(wù)，其中最常規(guī)的技術(shù)服務(wù)包括核酸、蛋白測(cè)序、引物合成，SNP分型,動(dòng)物培養(yǎng)及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

在國(guó)外，生命科學(xué)的研究已經(jīng)初步形成了一個(gè)大型技術(shù)平臺(tái)共享的研究形式，科研人員的主要工作是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)、若干實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析工作，而大量的基礎(chǔ)性的實(shí)驗(yàn)工作則由相應(yīng)的技術(shù)公司來(lái)完成，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2004年全美60%的SNP分型工作就是外包的生物技術(shù)公司完成。因?yàn)閷I(yè)的技術(shù)公司在各自領(lǐng)域有著雄厚的技術(shù)背景和豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，試驗(yàn)成功率更高,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也更可靠，這樣科研人員也能夠?qū)⒅饕Ψ旁谡嬲目蒲校瓕?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和數(shù)據(jù)分析中去。

出具有針對(duì)性的SNP分型技術(shù)，“巢式PCR-RFLP”基因分型技術(shù)，不同于傳統(tǒng)的只能對(duì)于有酶切位點(diǎn)的傳統(tǒng)的SNP分型的技術(shù)，本公司開(kāi)發(fā)的“巢式PCR-RFLP是針對(duì)任意的基因分型技術(shù)，使任何位點(diǎn)最終都能進(jìn)行常規(guī)限制性內(nèi)切酶鑒定；同時(shí)該SNP分型技術(shù)利用巢式PCR技術(shù)，使得多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行分析稱為可能。即使低濃度的DNA也能夠進(jìn)行快速準(zhǔn)確的分型工作。 與現(xiàn)有常規(guī)的分型技術(shù)相比，其最大的優(yōu)勢(shì)包括：

(一)所需DNA濃度低。1-2ng/uL也能完成檢測(cè)工作，而Taqman技術(shù)所需的DNA含量至少5ng/uL。

(二)價(jià)格低。由于不需要合成熒光探針，使得該技術(shù)比Taqman技術(shù)價(jià)格低，該優(yōu)勢(shì)在對(duì)多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行分型時(shí)更明顯。

與Taqman技術(shù)和普通技術(shù)的詳細(xì)對(duì)比

分型技術(shù) PCR-RFLP技術(shù) Taqman技術(shù) 普通PCR-RFLP技術(shù)
　　最佳運(yùn)用時(shí)機(jī) 200-600樣本，任何DNA多態(tài)位點(diǎn) 樣本量大于500人份 僅適合含有現(xiàn)成酶切位點(diǎn)的多態(tài)位點(diǎn)的分型
　　試劑投入 低 熒光探針，需3000-4000元。有可能實(shí)驗(yàn)失敗需重新花錢設(shè)計(jì)熒光探針。 低
　　技術(shù)的適用性 可適合任何多態(tài)位點(diǎn)的分型 基本適合任何多態(tài)位點(diǎn)的分型，但有時(shí)若干位點(diǎn)不能成功進(jìn)行試驗(yàn)；當(dāng)分型位點(diǎn)過(guò)于接近也不能用該方法。 僅適合含有現(xiàn)成酶切位點(diǎn)的多態(tài)位點(diǎn)的分型，有時(shí)出現(xiàn)的是一些稀有酶的酶切位點(diǎn)，導(dǎo)致效率低下或費(fèi)用昂貴； 結(jié)果判斷 直觀，明確，穩(wěn)定 間接，每管反應(yīng)必須加熒光參照ROX，否則結(jié)果判斷不確定 一般直觀，明確；有時(shí)酶切位點(diǎn)出現(xiàn)在非主頻等位基因上，導(dǎo)致結(jié)果判讀困難
　　結(jié)果穩(wěn)定性 穩(wěn)定 一般 穩(wěn)定
　　結(jié)果準(zhǔn)確性 準(zhǔn)確度高 一般 準(zhǔn)確度高
　　樣本消耗量 1-2ng 5-10ng 50－100ng
　　實(shí)驗(yàn)耗時(shí) 2-3周 由于要定制MGB熒光探針，和預(yù)實(shí)驗(yàn)，也需要2-3周 2-3周

操作流程　

1．基本信息收集具體內(nèi)容包括客戶信息、樣本數(shù)(case,control)數(shù)、位點(diǎn)信息等。
　
2 位點(diǎn)信息的查詢 主要包括：2.1 位點(diǎn)上下游各300bp的確切序列，基因頻度;2.2 有無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道證明該位點(diǎn)多態(tài)存在于中國(guó)人群;2.3 如無(wú)上述相關(guān)文獻(xiàn)，在J-SNP數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢?cè)撐稽c(diǎn)多態(tài)是否存在于東亞人群中。為了保證結(jié)果的可靠，實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)原則上應(yīng)以野生型進(jìn)行酶切鑒定，因此確認(rèn)snp的頻度是非常重要的。

3．樣品質(zhì)控從全部樣品中取8%樣品，即96個(gè)樣品中取8個(gè)樣品，用我們的一對(duì)特異的PCR引物進(jìn)行樣品質(zhì)控，以檢測(cè)送來(lái)樣品是否良好。因?yàn)榭蛻魳悠焚|(zhì)量是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素之一，只有客戶提供的樣品質(zhì)量可靠穩(wěn)定，那么結(jié)果自然就好。

4．引物設(shè)計(jì)同時(shí)設(shè)計(jì)AB兩套方案，分別以正鏈和負(fù)鏈為模板設(shè)計(jì)引物。

丙烯醛肉桂醛桂皮醛4-硝基肉桂醛