西亞試劑：：PYRO測序用于SNP基因分型

其實是一種段片段焦磷酸測序技術(shù)，在測序引物的引導下，完成段片段（含snp）的測序，從而實現(xiàn)基因分型。缺點：不能檢測長片段，對于重復序列沒有辦法。

原理簡介

1.測序引物與單鏈，PCR擴增的DNA模板相結(jié)合。然后將其與DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、熒光素酶和三磷酸腺苷雙磷酸酶，以及底物APS和熒光素一起孵育。

2.四種dNTP之一被加入反應體系，如與模扳配對，此dNTP與引物的末端形成共價鍵，dNTP的焦磷酸基團（PPi）釋放出來。而且釋放出來的Ppi的量與和模板結(jié)合的dNTP的量成正比。

3.ATP sulfurylase在adenosine 5´ phosphosulfate存在的情況下催化PPi形成ATP，ATP驅(qū)動luciferase介導的Luciferin向oxyluciferin的轉(zhuǎn)化，oxyluciferin發(fā)出與ATP量成正比的可見光信號。光信號由CCD攝像機檢測并由pyrogram™反應為峰。每個光信號的峰高與反應中摻入的核苷酸數(shù)目成正比。

4.TP和未摻入的dNTP由Apyrase降解，淬滅光信號，并再生反應體系。

5.然后加入下一種dNTP。最終待測序列順序，即可從反應光強的信號峰中讀出。在此過程之中有幾點值得注意的是，在體系中使用的是dATPS而非dATP，因為dATPS不是熒光素酶的底物，而且DNA聚合酶對dATPS的催化效率更高。而且在系統(tǒng)之中，底物的濃度已經(jīng)最佳化，使得dNTP的降解速度慢于它的摻入速度，ATP的合成速度快于水解速度，其中三磷酸腺苷雙磷酸酶的特異濃度，可以保證降解完全，使系統(tǒng)復原。

西亞試劑報道