西亞試劑：C1q放射免疫測定法

CFD稀釋液(即VBS)，10%三氯醋酸，C1q溶液

實驗設備

PEG(MW6 000)，離心機

實驗步驟

1. C1q標記法C1q的同位素標記，一般用125I，也可用131I。

125I的標記有兩種方法，即氯胺T法和乳過氧化物酶法。下面介紹氯胺T法：
   1) 在100μl C1q(1mg/ml)中，加入100μCi125I，混勻，然后加入25μl 0.4mol/L PB(pH值7.4，含1mg氯胺T)，冰浴中攪拌4～6min；

   2) 立即加入50μg/μl偏重亞硫酸鉀中止反應，再加入50μl 1%牛血清白蛋白作為載體蛋白；

   3) 過Sephadex G25柱(20cm×0.5cm，預先用pH值7.4、0.4mol/L PB平衡，并注入1ml 1%牛血清白蛋白)，以與游離125I 分開；

   4) 以適當濃度分裝后，放-70℃保存。為減少自身凝集，加入0.02%Tween20。

2. 取標記好的C1q，用CFD稀釋到1mg/ml。

3. 7 000r/min離心30min(4℃)，除去不溶性凝聚蛋白，上清液存放于4℃。

4. 取試管4支，每管加測定血清0.2ml，CFD 0.2ml，標記C1q 50μl(1μg/ml)。1、2管為測定管，3、4管為對照管。

5. 搖勻后，放25℃溫箱60min，取出再放4℃冰箱60min。

6. 各管加3ml PEG，最終濃渡為2.5%，搖勻后，放4℃ 2h。

7. 3、4管加10%三氯醋酸，沉淀所有的蛋白。將4個管都以1 000r/min離心20min，去上清液，沉淀物放γ計數(shù)器內測cpm。

8. 計算

B=(a加b2加c加d2)×100

B：標記C1q結合量(%)。a、b：1、2管(測定管)cpm。c、d：3、4管(對照管)cpm。

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