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每年有超過100個(gè)國家報(bào)道了近100百萬例登革病毒（Dengue virus，DENV）感染性疾病，包括50萬例登革出血熱。伊蚊屬的埃及伊蚊（Aedes aegypti）和白紋伊蚊（Aedes albopictus）是DENV的主要傳播者。MicroRNA（miRNA）是一類具有調(diào)控功能的小RNA，在眾多的細(xì)胞過程中發(fā)揮重要作用。在宿主和病原體間無休止的"軍備競(jìng)賽"中，病毒也會(huì)編碼miRNA幫助其成功的侵染。為尋找DENV編碼的功能性miRNA或病毒小RNA（vsRNAs），來自澳大利亞昆士蘭大學(xué)的研究團(tuán)隊(duì)采用小RNA測(cè)序技術(shù)對(duì)DENV侵染的A. aegypti中的小RNA表達(dá)譜進(jìn)行了深入挖掘和功能分析*，研究成果發(fā)表在近期的PNAS上。
研究人員首先構(gòu)建了2個(gè)小RNA文庫，分別來自DENV侵染的A. aegypti和對(duì)照的A. aegypti，并用高通量測(cè)序技術(shù)分析其中可能來自DENV編碼的小RNA（小RNA測(cè)序項(xiàng)目由聯(lián)川生物承擔(dān)完成）。測(cè)序共發(fā)現(xiàn)了484條不同長(zhǎng)度分布的vsRNAs，篩選出了6個(gè)vsRNAs，它們的候選莖環(huán)結(jié)構(gòu)位于病毒基因組RNA的5′與3′非翻譯區(qū)。為找出這6個(gè)vsRNAs對(duì)病毒RNA復(fù)制的影響，研究人員合成了與之對(duì)應(yīng)的inhibitor進(jìn)行抑制實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只在抑制DENV-vsRNA-5時(shí)，會(huì)導(dǎo)致病毒復(fù)制的顯著增加。通過沉默RNAi/miRNA通路相關(guān)的蛋白，發(fā)現(xiàn)Argonaute 2主要參與了DENV-vsRNA-5的生物合成。通過前體莖環(huán)的克隆，免疫共沉淀，對(duì)RNAi通路缺陷C6／36細(xì)胞（來自A. albopictus）以及哺乳Vero細(xì)胞系（非洲綠猴）中病毒小RNA檢測(cè)和分析，均證實(shí)了DENV-vsRNA-5的存在。不僅如此，通過分析DENV-vsRNA-5的mimics和inhibitor對(duì)DENV RNA表達(dá)水平的影響，也揭示出DENV-vsRNA-5在病毒自我調(diào)節(jié)中的作用，該小RNA可靶向調(diào)控DENV的非結(jié)構(gòu)蛋白1基因。值得注意的是，來自DENV血清型1和4，而非3的DENV-vsRNA-5同源mimics可以抑制DENV-2的復(fù)制。
上述研究結(jié)果表明，DENV可以編碼功能性vsRNAs，其中的一個(gè)病毒小RNA，有類似于miRNA的功能，可以特異地靶向調(diào)控病毒基因。這為未來使用小RNA抑制DENV復(fù)制開辟了一條新途徑
