西亞試劑：腸道病毒71型(EV 71)3D聚合酶的生物化學(xué)分析

國際學(xué)術(shù)期刊Biochimica et Biophysica Acta子刊Gene regulatory mechanism在線發(fā)表了上海巴斯德研究所豐田哲也組關(guān)于腸道病毒71型(EV71) 3D聚合酶生物化學(xué)分析的研究成果。

近年來，EV71病毒引發(fā)的手足口病流行呈逐年上升的態(tài)勢。自2008年截至2010年底，超過340萬中國兒童感染手足口病，其中1384名患兒因嚴(yán)重并發(fā)癥死亡。目前還沒有針對EV71病毒的有效藥物和疫苗。病毒RNA依賴的RNA聚合酶（RdRp）是病毒基因組編碼的一類重要的酶，它催化了病毒基因組的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。由于在宿主細(xì)胞中沒有類似的RNA依賴的RNA聚合酶（RdRp），所以這類聚合酶就成為了抗病毒藥物開發(fā)的首選靶標(biāo)。

蔣紅兵博士在豐田哲也研究員的指導(dǎo)下，表達純化了EV71病毒3D RNA聚合酶并對其基本生化學(xué)特性進行了鑒定。研究顯示：EV71病毒RNA聚合酶是特異性依賴于Mn2+的聚合酶，在Mg2+存在條件下完全沒有活性。EV71 3D聚合酶是引物依賴型的RNA聚合酶，它可以利用雙核苷酸和十核苷酸RNA作為引物，以poly(C)和基因組RNA為模板從頭起始轉(zhuǎn)錄，DNA引物如寡聚dT15可以增強其轉(zhuǎn)錄活性。EV71 3D聚合酶對RNA模板的結(jié)合力很弱，沒有末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶活性和逆轉(zhuǎn)錄酶活性，其酶促反應(yīng)動力學(xué)常數(shù)Km和Vmax通過經(jīng)典的Lineweaver-Burk作圖計算獲得。EV71 3D聚合酶對GTP底物的Km值很小表明聚合酶對GTP的親和力很高提示GTP核苷類似物可能是EV71病毒的有效抑制劑。EV71病毒的原型株BrCr-Tr和北京分離株BJ的聚合酶活性無顯著性差異，而且兩種不同株型的病毒聚合酶對UTP底物的動力學(xué)常數(shù)一致，這表明EV71 3D聚合酶可以作為抗病毒藥物設(shè)計的靶標(biāo)。

該研究得到了中國科學(xué)院和李嘉誠基金會的資助