西亞試劑：新操作改善診斷性microRNA的檢測(cè)

調(diào)節(jié)受精、發(fā)育和成熟的微小RNA()有希望成為疾病的生物標(biāo)志物。他們可從象血液、唾液和尿液一樣的常規(guī)收集液中收集到。但是，許多因子干擾miRNA測(cè)試的精確性。在期刊《分子診斷學(xué)》（Journal of Molecular Diagnostics）上在線出版的研究報(bào)道中，一組研究人員提供了收集與分析miRNA的具體操作，明顯地改善了他們的診斷精確性。

來(lái)自富蘭克林大學(xué)醫(yī)學(xué)與科學(xué)學(xué)院芝加哥醫(yī)學(xué)分院細(xì)胞與分子藥理學(xué)系首席研究人員Dominik M. Duelli博士報(bào)道，"我們的研究指出，生物樣本固有的區(qū)別與用于收集分析它們的方法能顯著地影響microRNA的檢測(cè)與定量。我們開發(fā)了克服這種妨礙活動(dòng)的措施，改善miRNA檢測(cè)敏感度達(dá)30倍。

在人體中存在有1000多個(gè)miRNAs。特異miRNAs的反常與疾病相關(guān)。測(cè)量體液中miRNAs的量能有助于疾病診斷或諸如懷孕的狀態(tài)診斷。Duelli博士和他的同事們定量化了兩個(gè)miRNAs，一個(gè)是miR-16，它發(fā)揮腫瘤抑制子的作用，在包括的一些癌癥中異?；騿适?；另一個(gè)是miR-223，它涉及妊娠和其他狀態(tài)，及一些惡性疾病。

杜克大學(xué)的共同研究人員Sarah Linnstaedt博士補(bǔ)充到，"一個(gè)廣泛應(yīng)用microRNA的根本挑戰(zhàn)是一直不能分離足夠的高品質(zhì)的分析材料。我們的文章列出有效收集血漿樣本的方法，把我們向?qū)崿F(xiàn)miRNA疾病診斷學(xué)的目標(biāo)推近一步"。

作者發(fā)現(xiàn)血液收集管的選擇影響定量。傳統(tǒng)的綠蓋肝素管幾乎完全干擾檢測(cè)。灰蓋含抗凝劑氟化鈉與草酸鉀的管子提供最好的結(jié)果。盡管血漿中豐富的miR-16約為miR-223的500倍，但二者的測(cè)定結(jié)果相同，這就提示由收集方法的選擇所導(dǎo)致的檢測(cè)上區(qū)別會(huì)一樣影響其他miRNAs。而且，收集血清miR-223給出了更多不定的結(jié)果，意味著對(duì)于一些miRNAs首選分析血漿型。

研究表明，干擾miRNAs檢測(cè)的血漿中天然成分可與miRNAs共純化。作者鑒定了純化中的額外步驟，即減少干擾的理想稀釋水平。Duelli 博士解釋說(shuō)"通過違反直覺地減少原材料，抑制子被假定稀釋到干擾的閾值以下。原材料的仔細(xì)滴定給出更精確的miRNAs定量值"。另一種措施，作者通過將一種可抑制血漿抑制子的酶與可提高miRNAs檢測(cè)敏感性約30倍的標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)合來(lái)避免污染問題。

最后，作者觀察到血漿提供者的不同得出不同的miRNA測(cè)量結(jié)果。Duelli博士說(shuō)："這些結(jié)果引伸出可能影響miRNA檢測(cè)與定量的可能性，所謂的可能性就是能改變血液化學(xué)的因素，包括飲食、運(yùn)動(dòng)、生物節(jié)律和季節(jié)。"

Duelli博士總結(jié)到，"這項(xiàng)工作的含意是，如果沒有考慮我們已鑒定的變量，人樣本miRNA的定量對(duì)于生物標(biāo)志物開發(fā)的目的是不可靠的”。（