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西亞試劑 —— 品質(zhì)可靠,值得信賴
本方法通過SDS裂解細(xì)胞,蛋白酶降解蛋白,CTAB去除多糖成分
一:儀器:同方法一
二:試劑:TE、TAE緩沖液;10%SDS;5MNaCL;
20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL 4.1gNaCL 溶于80ml水中,緩慢加入10gCTAB,加熱溶解);25/24/1,酚/氯仿/異戊醇; 24/1,氯仿/異戊醇;異丙醇;70%及100%乙醇
三:操作
1.5ml 對數(shù)生長期細(xì)菌細(xì)胞
離心,5000rpm,1min
沉淀
溶于500μl TE緩沖液中混勻
30μl 10%SDS,3μL蛋白酶K,混勻,37℃,1小時
100μl NaCL(5M) 混勻
80μl的CTAB/NaCL,*混勻;65℃ 10min(可不做)
加入等體積酚/氯仿/異戊醇混合液,混勻,
離心12000rpm,4-5min
取上清,以下操作與方法一中有機溶劑抽提、沉淀、干燥、除RNA 、復(fù)溶等步驟一致。
注意 1,*此步操作后,離心管中NaCL的濃度不應(yīng)低于0.5M,否則DNA將與CTAB共沉淀。
2,本法適用于從多糖含量高的樣品中提取DNA。對于菌體樣品,通過此流程,可以獲得較為完整的DNA分子。