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西亞試劑::質(zhì)粒的酵母直接轉(zhuǎn)化

用牙簽從平板中挑取單菌落(直徑2~3mm),轉(zhuǎn)移到1.5ml的無(wú)菌離心管中。

2.將10μl載體DNA(100μg)與10μl轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA混合,振蕩均勻。(若轉(zhuǎn)化DNA是用未經(jīng)RNA酶處理的“mini-prep DNA”方法制得,則不需加載體DNA)。

3.加0.5ml PLATE溶液,振蕩。

PLATE溶液:

40%聚乙二醇(PEG,分子量3350;Sigma P 3640)

0.1mol/L 醋酸鋰

10 mmol/L Tris-HCl (pH7.5)

1 mmol/L EDTA

4.置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,室溫培養(yǎng)4天。

5.置42℃下熱激15分鐘。

6.以8000~10000r/min離心10秒沉淀細(xì)胞,小心棄去上清液,將細(xì)胞輕輕懸浮到200μl無(wú)菌蒸餾水,使細(xì)胞懸浮均勻,再直接將混合液涂選擇平板。